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淺談常用的反相填料常選擇技巧News
淺談常用的反相填料常選擇技巧
發布時間:2020-03-10 點擊次數:267次
   反相填料常是以矽膠為基礎,表麵鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。 反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水,緩衝液與甲醇,已腈等混合物。 樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被衝出,而極性弱的組份會在色譜柱上有 更強的保留。 常用的反相填料有YMC C18填料(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等。
  聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優點是在PH值為1~ 14均可使用。 相對與矽膠基質的YMC C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白 質等樣品的分離非常有效。 現在的聚合物填料的缺點是相對矽膠基質填料,色譜柱柱效較低。
  其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由於其特殊的性質,一般僅限於特殊的 用途。如石墨化碳也用於正逐漸成為反相填料。這種填料的分離不同與矽膠基質烷基 鍵合相,石墨化碳的表麵即是保留的基礎,不再需其它的表麵改性,該柱填料一般比烷基 鍵合矽膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,石墨化碳可用於分離某些幾何導構體,又由 於HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用於HPLC, 氧化鋁微粒剛性強,可製成穩定的色譜柱柱床,其優點是可在PH高達12的流動相中使用。 但由於氧化鋁與堿性化合物作用也很強,應用範圍受到一定的限製,所以未能廣泛應用, 新型氧化鋯填料也可用於HPLC,商品化的僅有聚合物塗層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應 用PH範圍1~14,溫度可達100℃。由於氧化鋯填料幾年才開始研究,加之麵臨的實驗難 度,其重要用途與優勢尚在進行中。
  目前,商品化的色譜料粒度從1um到超過30um均有銷售,而目前分析分離主要用3um, 5um和10um填料,填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數,即柱效和背壓。粒度越小,填 充柱的柱效越高;小於3um的填料應用,在相同選擇性條件下,提高柱效可提高分離度, 但不是唯一的因素。如果固定相選擇是正確,但是分離度不夠,那麽選擇更小粒度的填料 是很有用的,3um填料填充柱的柱數比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而, 3um的色相譜的背壓卻是5um的2倍。與此同時,柱效提高意味著在相同條件下可以選擇更 短的色譜柱,以縮短分析時間,另外,可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使 用溫度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色譜柱的壓力。
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